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简易细菌测试瓶使用说明

例2、

①_√ ②_√③_√ ④ ⑤

①^／_√ ②^／_√ ③^／_√ ④^／ ⑤^／

①＂_√ ②＂_√ ③＂ ④＂_√ ⑤＂

+	+	+	-	-
+	+	+	-	-
+	+	-	+	-
	3	2	1

即

则此生长指标为321，级数为1。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列结果为：15×10¹=150个/ml。

例3、

① ②_√③ ④ ⑤

①^／_√ ②^／_√ ③^／_√ ④^／ ⑤^／

①＂ ②＂ ③＂ ④＂ ⑤＂

-	+	-	-	-
+	+	+	-	-
-	-	-	-	-
1	2	1

即

则此生长指标为121，级数<0。查三次重复计数表。121对应的细菌量为1.5个/ml。此系列结果为：≤1.5×10⁰既≤1.5个/ml。

例4、 ①_√ ②_√③_√ ④_√ ⑤_√

①^／_√ ②^／_√ ③^／_√ ④^／_√ ⑤^／_√ 即

①＂_√ ②＂_√ ③＂_√ ④＂ ⑤＂

简易细菌测试瓶使用说明

谢谢使用我公司出品的产品，请在使用前仔细阅读该使用说明手册。

一、 产品品种：

石油烃氧化菌测试瓶(HDB)

细菌总数测试瓶（BT）

大肠菌群测试瓶（TCB）

腐生菌测试瓶（TGB）

铁细菌测试瓶（FEB）(TEB)(FB)

硫酸盐还原菌测试瓶（SRB）

二、方法原理：

采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。

三、操作步骤：

① 将同一品种测试瓶排成一组，依次编上序号（按照估计的细菌量确定测试瓶个数，建议参考数值为：X×10⁰的细菌量用３个测试瓶、X×10¹的细菌量用４个测试瓶、X×10²的细菌量用５个测试瓶、X×10³的细菌量用６个测试瓶）。

做二个平行样重复试验时应排为二组；做三个平行样重复试验时应排为三组。

② 用无菌注射器取1ml代表性水样（采样方法依据GB/T12997-1991、GB/T12998-1991、GB/T12999-1991、GB/T14581-1993的规定进行）注入1号瓶内稀释，充分振摇，待用（平行样亦按此操作，下同）；

③ 用另一支无菌注射器从1号瓶内抽取1ml经充分振摇后的水样注入2号瓶内稀释，充分振摇，待用；

④ 再用一支无菌注射器从2号瓶中内抽取1ml经充分振摇后的水样注入3号瓶内稀释，充分振摇，待用；

⑤ 依次类推稀释直到一瓶为止，待用。

⑥ 将上述所有稀释过的测试瓶放入恒温培养箱中培养，按表１进行细菌生长的鉴别。

表１　　细 菌生长的鉴别方法

细菌瓶品种		规格型号	培养温度	培养时间	阳性反应特征
石油烃氧化菌测试瓶		HDB	29±1℃	5d	瓶中液体由紫红色变黄
细菌总数测试瓶		BT	37±2℃	24±2h	瓶中液体由红变黄、或液体混浊、或液体表面出现菌膜、或液体底部出现沉淀。
大肠菌群测试瓶	总大肠菌群	TCB	37±2℃	24±2h	瓶中液体由紫红变黄
大肠菌群测试瓶	粪大肠菌群	FCB	44±2℃	24±2h	瓶中液体由紫红变黄
腐生菌测试瓶		TGB	现场采样温度±3℃	24±2h	瓶中液体由红变黄
铁细菌测试瓶		FEB/TEB/FB		7d	瓶中液体棕色褪去，生成棕色或黑色沉淀
硫酸盐还原菌测试瓶		SRB		7d	瓶中微黄色液体变黑或生成黑色沉淀

细菌测试瓶测试方法及结果示例

例、做三个平行样重复试验，每个样稀释5个梯度：

① ② ③ ④ ⑤

①^／ ②^／ ③^／ ④^／ ⑤^／

①＂ ②＂ ③＂ ④＂ ⑤＂

即分别在① ①^／①＂号瓶中注入1ml水样，摇匀后取出 1ml再分别注入② ②^／②＂号瓶中；摇匀后取出1ml再分别注入到③ ③^／③＂号瓶中，依次类推，直至⑤ ⑤^／⑤＂号瓶。

在恒温下放置一定时间后（大肠菌群37℃，24小时）观察测试瓶阳性（变色）反应个数。

例1、（打√者为阳性反应---以+表示）

①_√ ② ③ ④ ⑤

①^／_√ ②^／_√ ③^／_√ ④^／ ⑤^／

①＂_√ ②＂_√ ③＂ ④＂ ⑤＂

+	-	-	-	-
+	+	+	-	-
+	+	-	-	-
3	2	1

即

则此生长指标为321，级数为0。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列结果为：15×10⁰=15个/ml。

示例３

①　　②　　③　　④　　⑤

+ + - + -

+ + + - -

生长指标：　　　　２　　１　　１

级　　数：　１０^１（②－１＝１）

示例４

① ② ③ ④ ⑤

- + - - -

+ - + - -

生长指标：１　１　１

级　　数：　１０^０

四、细菌量计量：

１．在一定温度下培养一定时间后，按瓶号列出稀释梯度，并根据细菌瓶阳性反应的个数，确定生长指标和级数（参见附录及示例）．

２．根据生长指标查表２或表３，确定细菌量基数并乘以级数，即为细菌量总数。

细菌量总数＝细菌量基数×级数

二组平行样重复试验查表２

三组平行样重复试验查表３

3、细菌量总数结果示例见表４

五、注意事项

1、测试瓶中若有白色沉淀为过量营养成份，属正常现象，不影响测试。

2、常温条件下，测试瓶储存有效期为一年。

3、测试瓶经稀释后，一定要用力振摇1~2分钟，以保证测试结果的准确性。

4、上述操作步骤中抽取和注入1ml水样适用于10ml规格的测试瓶。

表２二次重复细菌量基数表

生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)
000	0.0	020	0.9	111	2.0	201	5.0	220	25.0
001	0.5	100	0.6	120	2.0	210	6.0	221	70.0
010	0.5	101	1.2	121	3.0	211	13.0	222	110.0
011	0.9	110	1.3	200	2.5	212	20.0

表３三次重复细菌量基数表

生长指标	细菌量基数(个/ml)	生长指标	细菌量基数(个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)	生长指标	细菌量基数 (个/ml)
000	0.0	110	0.7	211	2.0	300	2.5	320	9.5
001	0.3	111	1.1	212	3.0	301	4.0	321	15.0
010	0.3	120	1.1	220	2.0	302	6.5	322	20.0
011	0.6	121	1.5	221	3.0	310	4.5	323	30.0
020	0.6	130	1.6	222	3.5	311	7.5	330	25.0
100	0.4	200	0.9	223	4.0	312	11.5	331	45.0
101	0.7	201	1.4	230	3.0	313	16.0	332	110.0
102	1.1	202	2.0	231	3.5			333	140.0
		210	1.5	232	4.0

表４细菌量总数结果报告示例表

示例	长菌观察						生长指标	级数	细菌量总数（个/ml）
	1号瓶	2号瓶	3号瓶	4号瓶	5号瓶	…
	0级	1级	2级	3级	4级	…
1	+-	--	--	--	--		100	10⁰	0.6×10⁰
2	++	++	--	--	--	…	200	10¹	2.5×10¹
3	+++	+++	+++	++-	---	…	320	10²	9.5×10²
4	+++	+++	+++	+++	+++	…	300	10⁴	≥2.5×10⁴

附录

一、生长指标的确定原则．

１．全部呈阳性反应的一列平行样应为生长指标的位数．

２．同一平行样，有Ｘ个阳性反应瓶，生长指标即为Ｘ．

二、级数的确定原则

１．全部呈阳性反应的一列平行样的瓶号数减去１，即为级数ｎ，以１０^ｎ表示．

２．１号瓶的２或３个平行样未全部发生阳性反应时，级数为０，即为１０^０

示例１

① ② ③ ④ ⑤

+ - - - -

+ + - - -

+ + + - -

生长指标：　３　　２　１

级　　数：　１０^０（①－１＝０）

示例２

① ② ③ ④ ⑤

+ + + - -

+ + + + +

生长指标：　　　　　３　　１　１

级　　数：　１０^２（③－１＝２）

+	+	+	+	+
+	+	+	-	+
+	+	+	-	-
		3	1	2

即

则此生长指标为312，级数为2。查三次重复计数表。312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列结果为：11.5×10²个/ml。

例5、①_√ ②_√③_√ ④_√ ⑤_√

①^／_√ ②^／_√ ③^／_√ ④^／_√ ⑤^／_√

①＂_√ ②＂_√ ③＂_√ ④＂_√ ⑤＂

+ + + +

即 + + + +

+ + + +

3 0 0

则此生长指标为300，级数为4。查三次重复计数表。300对应的细菌量为2.5个/ml。则此系列结果为≥2.5×10⁴个/ml。

注意事项：

① 做几个平行样对应查几次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。

② 计算公式为：瓶号数-1=级数n，即在结果后应 ×10ⁿ。

如 1号瓶级数为0级，即在结果后×10⁰；

2号瓶级数为1级，即在结果后×10¹；

3号瓶级数为2级，即在结果后×10²；

③ 全部阳性反应的一列应为生长指标的第1位数。

如例1中的生长指标第1位数3对应① ①^／①＂号瓶

例2中的生长指标第1位数3对应② ②^／②＂号瓶

例4中的生长指标第1位数3对应③ ③^／③＂号瓶依次类推。

④ 如果列（① ①^／①＂号瓶）未全部发生阳性反应，结果应注明“≤”，如例3；如果至一列（⑤ ⑤^／⑤＂号瓶）全部发生阳性反应，结果应注明“≥”，（如例5）。此情况下说明细菌量大，应

增加测试瓶的个数，以求得较准确的结果。

⑤ 测试瓶注入水样（稀释）后应用力振摇，以保证结果的准确性；逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性。

简易细菌测试瓶

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